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  • 发布时间: 2018 - 05 - 21
    技术参数:○ 流速范围:0.001~10.000mL/min○ 流速准确度:±0.5%○ 最大耐压:9000 PSI○ 压力脉动:≤1%○ 控温范围:室温+5℃~70℃○ 温度准确度:±1.0%○ 温度稳定性:±0.1%○ 进样重复性:RSD≤0.3%○ 交叉污染:○ 线性:0.9999○ 采样率:100Hz
    RIGOL L-3000高效液相色谱系统采用UPLC规格设计,最高耐压达9000psi,是同类仪器中耐压范围最高的液相色谱系统,流量范围宽至10mL/min,将其应用领域从常规液相拓展到快速液相。该款仪器具有完全自主知识产权,关键核心部分均为自主设计、加工制造。可广泛应用于药物分析、环境监测、食品安全、石油化工、农林牧渔、教育科研等各个领域。
  • 发布时间: 2018 - 05 - 21
    ○ 流速范围:0.001~10.000mL/min○ 流速准确度:±0.5%○ 最大耐压:9000 PSI○ 压力脉动:≤1%○ 控温范围:室温+5℃~70℃○ 温度准确度:±1.0%○ 温度稳定性:±0.1%○ 进样重复性:RSD≤0.3%○ 交叉污染:○ 线性:0.9999○ 采样率:100Hz○ 阵列数:1024阵列
    RIGOL L-3000高效液相色谱系统采用UPLC规格设计,最高耐压达9000psi,是同类仪器中耐压范围最高的液相色谱系统,流量范围宽至10mL/min,将其应用领域从常规液相拓展到快速液相。该款仪器具有完全自主知识产权,关键核心部分均为自主设计、加工制造。可广泛应用于药物分析、环境监测、食品安全、石油化工、农林牧渔、教育科研等各个领域。
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    ○ 流速范围:0.001~10.000mL/min○ 流速准确度:±0.5%○ 最大耐压:9000 PSI○ 压力脉动:≤1%○ 控温范围:室温+5℃~70℃○ 温度准确度:±1.0%○ 温度稳定性:±0.1%○ 进样重复性:RSD≤0.3%○ 交叉污染:○ 线性:0.9999○ 采样率:100Hz○ 光源:高效LED 470nm
    RIGOL L-3000高效液相色谱系统采用UPLC规格设计,最高耐压达9000psi,是同类仪器中耐压范围最高的液相色谱系统,流量范围宽至10mL/min,将其应用领域从常规液相拓展到快速液相。该款仪器具有完全自主知识产权,关键核心部分均为自主设计、加工制造。可广泛应用于药物分析、环境监测、食品安全、石油化工、农林牧渔、教育科研等各个领域。
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    ○ 流速范围:0.001~10.000mL/min○ 流速准确度:±0.5%○ 最大耐压:9000 PSI○ 压力脉动:≤1%○ 控温范围:室温+5℃~70℃○ 温度准确度:±1.0%○ 温度稳定性:±0.1%○ 进样重复性:RSD≤0.3%○ 交叉污染:○ 线性:0.9999○ 采样率:100Hz
    RIGOL L-3000高效液相色谱系统采用UPLC规格设计,最高耐压达9000psi,是同类仪器中耐压范围最高的液相色谱系统,流量范围宽至10mL/min,将其应用领域从常规液相拓展到快速液相。该款仪器具有完全自主知识产权,关键核心部分均为自主设计、加工制造。可广泛应用于药物分析、环境监测、食品安全、石油化工、农林牧渔、教育科研等各个领域。
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    ○ 流速范围:0.001~10.000mL/min○ 流速准确度:±0.5%○ 最大耐压:9000 PSI○ 压力脉动:≤1%○ 控温范围:室温+5℃~70℃○ 温度准确度:±1.0%○ 温度稳定性:±0.1%○ 采样率:100Hz
    RIGOL L-3000高效液相色谱系统采用UPLC规格设计,最高耐压达9000psi,是同类仪器中耐压范围最高的液相色谱系统,流量范围宽至10mL/min,将其应用领域从常规液相拓展到快速液相。该款仪器具有完全自主知识产权,关键核心部分均为自主设计、加工制造。可广泛应用于药物分析、环境监测、食品安全、石油化工、农林牧渔、教育科研等各个领域。
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DAD(二极管阵列检测器)使用秘籍

日期: 2018-06-05
浏览次数: 390

        二极管阵列检测器目前已在高效液相色谱分析中大量使用,一般认为是液相色谱最有发展、最好的检测器。随着DAD检测器的普及,我们很多客户反馈在使用DAD的过程中有些许疑惑,于是DAD秘籍应运而生,帮助用户无忧修炼 :)


1、明表象

        四张图分清紫外检测器(UVD)和二极管阵列检测器(DAD)

外观差不多:

DAD(二极管阵列检测器)使用秘籍

原理有不同:

紫外检测器先分光,取得单色光再通过流通池,用光电二极管检测,只能获得特定波长的信号;

二极管阵列检测器复色光先通过流通池,再分光,整个光谱由二极管阵列检测,同时获得一段光谱范围内信号。

功能有差异:DAD(二极管阵列检测器)使用秘籍

DAD(二极管阵列检测器)使用秘籍

DAD谱图更丰富:

DAD(二极管阵列检测器)使用秘籍

        DAD是大势所趋;一般情况下,二极管阵列检测器可以完全替代紫外检测器。同时因为DAD可以获取更多的数据信息,用于辅助定性和光谱检索,因此DAD的使用会越来越普遍。


2、知用法

        DAD再牛,也要会使用。相对紫外检测器,DAD的设置和参数优化会更多一些,对使用者的要求也高一些。不过不用怕,只要掌握了下面的秘籍,你也可以轻松玩转DAD。

        有硬件就要有软件,DAD全部由工作站来控制。下面就以RIGOL UltraChrom 和安捷伦 Chemstation为例,看看工作站方法设置。(实验方法是药典、标准等既定方法规定的,按照方法中的要求设定方法。)

        (1)下面来看看 RIGOL Ultrachrom 工作站方法设置: 这个方法,用紫外检测器得跑三遍,但用DAD可以一次搞定,如何设置,看下图:

 DAD(二极管阵列检测器)使用秘籍

(2)再来看看 安捷伦Chemstation工作站方法设置:

DAD(二极管阵列检测器)使用秘籍

【插播】DAD 方法中参数说明:

【一般情况下】

        样品波长:按照方法要求选择检测波长,可以参考下文中的详细说明。

        样品带宽:主要影响峰高和基线噪音,因此优化带宽可以获得最佳信噪比;样品带宽选择的最直接依据是其吸收光谱中峰的峰宽,详见后面的解释。4nm是比较通用的样品带宽。

        参比波长:选择合适的参比波长可以减小梯度洗脱过程中的基线漂移,甚至可以通过优化参比波长对共流出峰(没分开的峰)做分别检测。一般选择在靠近样品信号的无吸收或低吸收区域,请参考下文详细说明。

        参比带宽:是参比波长取值的波长范围,影响参比波长设置的实际效果。参比带宽至少要与样品波长的带宽相等,许多情况下选择100nm作为缺省值,如果在不想用参比波长的情况下,也可以直接将带宽设置为0(或去掉参比波长前面的勾,如Agilent仪器)。

        波长范围:是工作站采集3D光谱数据的波长范围。一般按照方法要求,没有要求则需要包含所有被测物质的检测波长,但是较宽的波长范围采集会占用更多的磁盘空间。

        步进: 一般选择1nm,步进的选择对谱带数据点数有影响。

        采样率/峰宽:采样率和峰宽是同一目的的两种不同实现方式,其目的都是为了真实的采集到一个色谱峰。一般选择10Hz。采样率高能更真实的还原峰型,但会带来更大的基线噪音。反之过低的采样率会导致峰变形,但基线噪声更小。选择合适的采样率以获得最佳的信噪比。

        曝光时间:这是RIGOL L-3520 DAD的一项高级参数设置,一般选择20ms。

        滤波设置: 这是RIGOL L-3520 DAD的一项高级参数设置,快/正常/慢/无,一般选择正常。

        要弄明白一般为什么这样设置,请您接着看每个参数的意义~


3、懂原理

1.  样品和参比波长及带宽

        简单说:你看到的色谱图上的最终吸光度值是这么来的:

        吸光度=以样品波长为中心在样品带宽范围内的所有波长吸光度平均值-以参比波长为中心在参比带宽范围内的所有波长吸光度平均值;

        这个吸光度是实时计算的,你看到的色谱图中的每一个点,都是这个公式计算来的。(当然如果关闭了参比波长,就没有后半截了)

        打个比方,检测器方法中的信号 A 设置为样品 254.0/4、参比360.0/100,即从 252到 256 nm 波长范围内的平均吸光度减去从 310 到 410 nm 波长范围内的平均吸光度。

        想一想,我们在走梯度,流动相的组成时时变化,导致基线漂移,大家应该经常遇到。为啥会这样?主要因为流动相变化时:

(A)流动相组成变化导致背景吸收变化(尤其是检测波长比较短的时候,如203nm);

(B)流动相组成变化导致折光系数改变(这个是流通池里面光折射的物理的影响)。

        现在回顾下上面的公式,其实: 吸光度=(样品吸收+背景吸收)-(参比吸收+背景吸收);如果我们把参比波长选在一个样品没吸收的地方,则:吸光度=(样品吸收+背景吸收)-(0+背景吸收);换句话说,背景变化被扣掉了所以基线不飘了!就像下面这样:

DAD(二极管阵列检测器)使用秘籍

         所以,小伙伴们,用DAD时,正确选择参比波长,是纠正基线漂移的法宝。还有,一般参比带宽都选的那么宽,为什么? 因为,带宽越宽,被平均的数据点越多,偶然性变化带来的影响越低,背景扣除越准确稳定。100nm是比较常用的参比带宽。但参比带宽范围内注意不要有吸收,否则会降低峰高,搞不好出来一堆倒峰。

        样品带宽为啥多数是4nm?样品带宽决定了样品信号平均的波长范围,显然带宽越宽,平均的越多,基线越稳定。但如果太宽了,峰的高度和光谱的分辨率都会受影响!这里只要记住,带宽宽,基线噪声小,峰高降低;带宽窄,基线噪声大,峰高受影响小。如下图:

        一般4nm就可以了~

DAD(二极管阵列检测器)使用秘籍

2. 步进

        就是采集光谱时,离多远采集一个数据点。步子大了,得到的光谱图清晰度不够;步子小了,会产生大量的数据迅速填满你的磁盘。而光谱图的清晰度,又会影响峰纯度分析时的准确性,所以选择什么样的步进,还要看看以后的用途。 

3.采样率/峰宽

        采样率和峰宽是同一目的的两种不同实现方式,其目的都是为了真实的采集到一个色谱峰。一般选择10Hz,采样率高能更真实的还原峰型,但会带来更大的基线噪音。反之过低的采样率会导致峰变形,但基线噪声更小。选择合适的采样率以获得最佳的信噪比。

        来张图就明白了~

DAD(二极管阵列检测器)使用秘籍

4.曝光时间

        曝光时间属于RIGOL L-3520 DAD高级选项,曝光时间与采样率有负相关,同时也跟曝光次数有关。一般选择20ms就可以满足要求了,不需要用户做过多设置。

5. 滤波

        滤波属于RIGOL L-3520 DAD高级选项,滤波是针对采集后的基线做了微小的处理。滤波目前有四种速度,分别是快、正常、慢和无。滤波速度越慢滤波相对效果会好一些,但是平常使用选择正常就可以了。


4、懂数据

        PDA视图分析,按照正确的设置方法,待测物质分析完毕,则需要使用PDA视图:

DAD(二极管阵列检测器)使用秘籍

        3D谱图可以比较直观地查看 信号-时间-波长 三维视图,通过调整等高图中横轴(波长轴)即样品的检测波长,纵轴(时间轴)即保留时间,可以得到合适的色谱图和光谱图,通过峰纯度可以确定检测峰是否含有其它物质。确切地说,每种一定浓度范围内的具有紫外吸收的物质都会有其独特的光谱图,通过比较对照品与供试品谱图目标峰的保留时间范围内的光谱图,如不相同则不含待测物质。


5、解难题

        DAD常见问题分析:

        (1)浓度太高超量程平头了

DAD(二极管阵列检测器)使用秘籍

 

        (2)浓度太低噪声已经掩盖了部分峰形

DAD(二极管阵列检测器)使用秘籍

         这两种情况的处理方法:适当地增减样品的浓度,保证光谱图在合适的浓度范围内显示。同时也需要考虑到流动相的温度、成分或PH值的变化。 

        以下是一种或多种因素可造成吸光度光谱的形状差异:

        (A)检测器噪声(流动相温度的变化)

        (B)高浓度样品引起测光误差(应将化合物的最大吸光度控制在1AU以下)

        (C)流动相PH值或成分改变(如下图所示)

DAD(二极管阵列检测器)使用秘籍

         (3)色谱图出现倒峰的问题

DAD(二极管阵列检测器)使用秘籍

         这种情况的处理方法: 在3D谱图里观察最大吸收波长出现倒峰,可能是因为你选的参比波长不合适 。 

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